سیل کلچر کی آلودگی کو مؤثر طریقے سے کم کیا گیا تھا۔

سیل ثقافتوں کی آلودگی سیل کلچر لیبارٹریوں میں آسانی سے سب سے عام مسئلہ بن سکتی ہے، بعض اوقات بہت سنگین نتائج کا باعث بنتی ہے۔سیل کلچر کے آلودگیوں کو دو قسموں میں تقسیم کیا جا سکتا ہے، کیمیائی آلودگی جیسے میڈیم، سیرم اور پانی کی نجاست، اینڈوٹوکسین، پلاسٹائزرز اور ڈٹرجنٹ، اور حیاتیاتی آلودگی جیسے بیکٹیریا، مولڈ، خمیر، وائرس، مائکوپلاسماس کراس انفیکشن۔دوسرے سیل لائنوں سے آلودہ۔اگرچہ آلودگی کو مکمل طور پر ختم کرنا ناممکن ہے، لیکن اس کی تعدد اور شدت کو اس کے ماخذ کو اچھی طرح سمجھ کر اور اچھی جراثیم کش تکنیکوں پر عمل کر کے کم کیا جا سکتا ہے۔

1. یہ حصہ حیاتیاتی آلودگی کی اہم اقسام کا خاکہ پیش کرتا ہے:
بیکٹیریل آلودگی
سڑنا اور وائرس کی آلودگی
مائکوپلاسما آلودگی
خمیر کی آلودگی

1.1 بیکٹیریل آلودگی
بیکٹیریا ہر جگہ موجود واحد خلیے والے مائکروجنزموں کا ایک بڑا گروپ ہے۔وہ عام طور پر قطر میں صرف چند مائکرون ہوتے ہیں اور مختلف شکلوں میں آسکتے ہیں، کرہوں سے لے کر سلاخوں اور سرپلوں تک۔ان کی ہر جگہ، سائز، اور تیز رفتار ترقی کی شرح کی وجہ سے، بیکٹیریا، خمیر اور سانچوں کے ساتھ، سیل کلچر میں سب سے عام حیاتیاتی آلودگی ہیں۔

1.1.1 بیکٹیریل آلودگی کا پتہ لگانا
بیکٹیریل آلودگی کا بصری معائنہ کے ذریعے اس کے انفیکشن ہونے کے چند دنوں کے اندر آسانی سے پتہ چل جاتا ہے۔
متاثرہ ثقافتیں عام طور پر ابر آلود دکھائی دیتی ہیں (یعنی ٹربائڈ)، بعض اوقات سطح پر پتلی فلم کے ساتھ۔
کلچر میڈیم کے پی ایچ میں اچانک گرنے کا بھی اکثر سامنا ہوتا ہے۔
کم طاقت والے خوردبین کے تحت، بیکٹیریا خلیوں کے درمیان چھوٹے، حرکت پذیر دانے داروں کے طور پر ظاہر ہوتے ہیں، اور ایک اعلی طاقت خوردبین کے تحت مشاہدہ انفرادی بیکٹیریا کی شکلوں کو حل کر سکتا ہے۔

1.2 سڑنا اور وائرس کی آلودگی
1.2.1 مولڈ آلودگی
مولڈز فنگل بادشاہی کے یوکرائیوٹک مائکروجنزم ہیں جو ملٹی سیلولر فلیمینٹس کی شکل میں بڑھتے ہیں جسے ہائفائی کہتے ہیں۔ان ملٹی سیلولر فلیمینٹس کے مربوط نیٹ ورکس میں جینیاتی طور پر ایک جیسی نیوکلی ہوتی ہے جسے کالونیز یا مائسیلیم کہتے ہیں۔

خمیر کی آلودگی کی طرح، آلودگی کے ابتدائی مرحلے کے دوران ثقافت کا پی ایچ مستحکم رہتا ہے اور پھر تیزی سے بڑھتا ہے کیونکہ کلچر زیادہ شدید طور پر متاثر ہوتا ہے اور ابر آلود ہو جاتا ہے۔خوردبین کے نیچے، مائسیلیم عام طور پر تنت دار ہوتا ہے، بعض اوقات بیضوں کے گھنے جھرمٹ کے طور پر۔بہت سے سانچوں کے بیضہ اپنے غیر فعال مرحلے کے دوران انتہائی سخت اور غیر مہمان ماحول میں زندہ رہ سکتے ہیں اور صرف اس وقت فعال ہوتے ہیں جب نشوونما کے صحیح حالات کا سامنا ہو۔

1.2.2 وائرس کی آلودگی
وائرس خوردبینی متعدی ایجنٹ ہیں جو تولید کے لیے میزبان سیل کی مشینری پر قبضہ کر لیتے ہیں۔ان کے انتہائی چھوٹے سائز کی وجہ سے ان کا کلچر میں پتہ لگانا اور سیل کلچر لیبارٹریوں میں استعمال ہونے والے ریجنٹس سے ہٹانا مشکل ہو جاتا ہے۔چونکہ زیادہ تر وائرسز کے اپنے میزبانوں کے لیے بہت سخت تقاضے ہوتے ہیں، اس لیے وہ عام طور پر میزبان کے علاوہ دیگر انواع کے سیل کلچر کو بری طرح متاثر نہیں کرتے۔
تاہم، وائرس سے متاثرہ سیل کلچرز کا استعمال لیبارٹری کے اہلکاروں کی صحت کے لیے سنگین خطرہ بن سکتا ہے، خاص طور پر اگر لیبارٹری میں انسانی یا پرائمیٹ سیلز اگائے گئے ہوں۔

سیل کلچرز میں وائرل انفیکشن کا پتہ الیکٹران مائیکروسکوپی، اینٹی باڈیز کے سیٹ کے ساتھ امیونوسٹیننگ، ELISA، یا PCR مناسب وائرل پرائمر کے ذریعے لگایا جا سکتا ہے۔

1.3مائکوپلاسما آلودگی
مائکوپلاسما سیل کی دیواروں کے بغیر سادہ بیکٹیریا ہیں، اور ان کے بارے میں سوچا جاتا ہے کہ وہ سب سے چھوٹے خود کو نقل کرنے والے جاندار ہیں۔ان کے انتہائی چھوٹے سائز کی وجہ سے (عام طور پر 1 مائکرون سے کم)، مائکوپلاسما کا پتہ لگانا اس وقت تک مشکل ہوتا ہے جب تک کہ وہ انتہائی زیادہ کثافت تک نہ پہنچ جائیں اور سیل کلچر کو خراب کرنے کا سبب بنیں۔اس وقت تک، عام طور پر انفیکشن کی کوئی واضح علامت نہیں ہوتی ہے۔

1.3.1 مائکوپلاسما آلودگی کا پتہ لگانا
کچھ آہستہ بڑھنے والے مائکوپلاسما سیل کی موت کا سبب بنے بغیر ثقافتوں میں برقرار رہ سکتے ہیں، لیکن وہ ثقافتوں میں میزبان خلیوں کے رویے اور میٹابولزم کو بدل دیتے ہیں۔

دائمی مائکوپلاسما انفیکشن کی خصوصیت سیل کے پھیلاؤ کی شرح میں کمی، سنترپتی کثافت میں کمی اور معطلی کلچر میں جمع ہونے سے ہوسکتی ہے۔
تاہم، مائکوپلاسما کی آلودگی کا پتہ لگانے کا واحد قابل اعتماد طریقہ فلوروسینٹ سٹیننگ (مثال کے طور پر، ہوچسٹ 33258)، ELISA، PCR، امیونوسٹیننگ، آٹوراڈیوگرافی، یا مائکروبیل ٹیسٹنگ کا استعمال کرتے ہوئے باقاعدگی سے ثقافت کی جانچ کرنا ہے۔

1.4 خمیر کی آلودگی
خمیر فنگل بادشاہی کے واحد خلیے والے یوکرائٹس ہیں، جن کا سائز چند مائکرون (عام طور پر) سے لے کر 40 مائکرون (شاذ و نادر ہی) تک ہوتا ہے۔

1.4.1 خمیر کی آلودگی کا پتہ لگانا
جیسا کہ بیکٹیریل آلودگی کے ساتھ، خمیر سے آلودہ ثقافتیں ابر آلود ہو سکتی ہیں، خاص طور پر اگر آلودگی ایک اعلی درجے کے مرحلے میں ہو۔خمیر سے آلودہ ثقافتوں کا pH بہت کم تبدیل ہوتا ہے جب تک کہ آلودگی زیادہ شدید نہ ہو جائے، جس مرحلے پر عام طور پر pH بڑھ جاتا ہے۔خوردبین کے نیچے، خمیر انفرادی بیضوی یا کروی ذرات کے طور پر ظاہر ہوتا ہے اور چھوٹے ذرات پیدا کر سکتا ہے۔

2. کراس انفیکشن
اگرچہ مائکروبیل آلودگی کے طور پر عام نہیں ہے، HeLa اور دیگر تیزی سے بڑھتی ہوئی سیل لائنوں کے ساتھ بہت سے سیل لائنوں کی وسیع کراس آلودگی سنگین نتائج کے ساتھ واضح طور پر بیان کردہ مسئلہ ہے.معروف سیل بینکوں سے سیل لائنز حاصل کریں، سیل لائنوں کی خصوصیات کو باقاعدگی سے چیک کریں، اور اچھی ایسپٹک تکنیک استعمال کریں۔یہ مشقیں آپ کو کراس آلودگی سے بچنے میں مدد کریں گی۔ڈی این اے فنگر پرنٹنگ، کیریوٹائپنگ اور آئسو ٹائپنگ اس بات کی تصدیق کر سکتی ہے کہ آیا آپ کے سیل کلچر میں کراس آلودگی موجود ہے۔

اگرچہ مائکروبیل آلودگی کے طور پر عام نہیں ہے، HeLa اور دیگر تیزی سے بڑھتی ہوئی سیل لائنوں کے ساتھ بہت سے سیل لائنوں کی وسیع کراس آلودگی سنگین نتائج کے ساتھ واضح طور پر بیان کردہ مسئلہ ہے.معروف سیل بینکوں سے سیل لائنز حاصل کریں، سیل لائنوں کی خصوصیات کو باقاعدگی سے چیک کریں، اور اچھی ایسپٹک تکنیک استعمال کریں۔ان طریقوں سے آپ کو کراس آلودگی سے بچنے میں مدد ملے گی۔ڈی این اے فنگر پرنٹنگ، کیریوٹائپنگ اور آئسو ٹائپنگ اس بات کی تصدیق کر سکتی ہے کہ آیا آپ کے سیل کلچر میں کراس آلودگی موجود ہے۔