سیل کلچر کا ماحول سیل کی پیداوار کو متاثر کرتا ہے۔

سیل کلچر کے اہم فوائد میں سے ایک سیل ری پروڈکشن (یعنی درجہ حرارت، پی ایچ، اوسموٹک پریشر، O2 اور CO2 تناؤ) اور جسمانی ماحول (یعنی ہارمون اور غذائی اجزاء) کی جسمانی کیمسٹری میں ہیرا پھیری کرنے کی صلاحیت ہے۔درجہ حرارت کے علاوہ، ثقافتی ماحول ترقی کے ذریعہ سے کنٹرول کیا جاتا ہے.

اگرچہ ثقافت کا جسمانی ماحول اس کے جسمانی اور کیمیائی ماحول کی طرح واضح نہیں ہے، لیکن سیرم کے اجزاء کی بہتر تفہیم، پھیلاؤ کے لیے درکار نمو کے عوامل کی شناخت، اور ثقافت میں خلیوں کے مائیکرو ماحولیات کی بہتر تفہیم۔(یعنی سیل سیل کا تعامل، گیس کا پھیلاؤ، میٹرکس کے ساتھ تعامل) اب کچھ سیل لائنوں کو سیرم فری میڈیا میں کلچر کرنے کی اجازت دیتا ہے۔

1. ثقافتی ماحول سیل کی ترقی کو متاثر کرتا ہے۔
براہ کرم نوٹ کریں کہ سیل کلچر کی شرائط ہر سیل کی قسم کے لیے مختلف ہوتی ہیں۔
کسی خاص خلیے کی قسم کے لیے درکار ثقافتی حالات سے انحراف کے نتائج غیر معمولی فینوٹائپس کے اظہار سے لے کر سیل کلچر کی مکمل ناکامی تک ہوتے ہیں۔لہذا، ہم تجویز کرتے ہیں کہ آپ اس سیل لائن سے واقف ہو جائیں جس میں آپ کی دلچسپی ہے اور ہر اس پروڈکٹ کے لیے فراہم کردہ ہدایات پر سختی سے عمل کریں جو آپ اپنے تجربے میں استعمال کرتے ہیں۔

2. اپنے خلیات کے لیے ایک بہتر سیل کلچر ماحول بنانے کے لیے احتیاطی تدابیر:
کلچر میڈیا اور سیرم (مزید معلومات کے لیے نیچے دیکھیں)
پی ایچ اور CO2 کی سطح (مزید معلومات کے لیے نیچے دیکھیں)
پلاسٹک کی کاشت کریں (مزید معلومات کے لیے نیچے دیکھیں)
درجہ حرارت (مزید معلومات کے لیے نیچے دیکھیں)

2.1 ثقافتی میڈیا اور سیرم
کلچر میڈیم ثقافت کے ماحول کا سب سے اہم حصہ ہے، کیونکہ یہ خلیوں کی نشوونما کے لیے ضروری غذائی اجزاء، نشوونما کے عوامل اور ہارمونز فراہم کرتا ہے، اور ثقافت کے پی ایچ اور اوسموٹک دباؤ کو منظم کرتا ہے۔

اگرچہ ابتدائی سیل کلچر کے تجربات بافتوں کے عرقوں اور جسمانی رطوبتوں سے حاصل کیے گئے قدرتی ذرائع ابلاغ کا استعمال کرتے ہوئے کیے گئے تھے، لیکن معیاری بنانے کی ضرورت، میڈیا کے معیار اور بڑھتی ہوئی مانگ نے حتمی میڈیا کی ترقی کا باعث بنا۔میڈیا کی تین بنیادی قسمیں ہیں بیسل میڈیا، کم سیرم میڈیا اور سیرم فری میڈیا، اور ان کی سیرم سپلیمنٹیشن کے لیے مختلف تقاضے ہیں۔

2.1.1 بنیادی میڈیم
گبکو سیل کلچر میڈیم
زیادہ تر سیل لائنیں بنیادی ذرائع ابلاغ میں اچھی طرح بڑھتی ہیں جن میں امینو ایسڈ، وٹامنز، غیر نامیاتی نمکیات، اور کاربن ذرائع (جیسے گلوکوز) ہوتے ہیں، لیکن ان بنیادی میڈیا فارمولیشنوں کو سیرم کے ساتھ پورا کرنا ضروری ہے۔

2.1.2 کم سیرم میڈیم
گبکو لو سیرم میڈیم والی بوتل
سیل کلچر کے تجربات میں سیرم کے منفی اثرات کو کم کرنے کی ایک اور حکمت عملی سیرم سے کم میڈیا کا استعمال کرنا ہے۔کم شدہ سیرم میڈیم ایک بنیادی میڈیم فارمولا ہے جو غذائی اجزاء اور جانوروں سے حاصل کردہ عوامل سے بھرپور ہے، جو سیرم کی مطلوبہ مقدار کو کم کر سکتا ہے۔

2.1.3 سیرم فری میڈیم
Gibco سیرم فری میڈیم کے ساتھ بوتل
سیرم فری میڈیم (SFM) مناسب غذائیت اور ہارمون فارمولیشنز کے ساتھ سیرم کی جگہ لے کر جانوروں کے سیرم کے استعمال کو روکتا ہے۔بہت سی بنیادی ثقافتوں اور سیل لائنوں میں سیرم فری میڈیم فارمولیشنز ہوتے ہیں، جن میں چینی ہیمسٹر اووری (CHO) ریکومبیننٹ پروٹین پروڈکشن لائن، مختلف ہائبرڈوما سیل لائنز، کیڑے کی لائنیں Sf9 اور Sf21 (Spodoptera frugiperda) شامل ہیں، نیز وائرس کی پیداوار کے لیے میزبان کے لیے۔ (مثال کے طور پر، 293، VERO، MDCK، MDBK)، وغیرہ۔ سیرم سے پاک میڈیم استعمال کرنے کا ایک اہم فائدہ یہ ہے کہ نشوونما کے عوامل کے مناسب امتزاج کو منتخب کر کے مخصوص خلیوں کی اقسام کے لیے میڈیم کو منتخب کرنے کی صلاحیت ہے۔درج ذیل جدول میں سیرم فری میڈیا کے فوائد اور نقصانات کی فہرست دی گئی ہے۔

فائدہ
وضاحت میں اضافہ کریں۔
زیادہ مستقل کارکردگی
آسان صاف اور بہاو پروسیسنگ
سیل کے فنکشن کا درست اندازہ لگائیں۔
پیداواری صلاحیت میں اضافہ کریں۔
جسمانی رد عمل کا بہتر کنٹرول
بہتر سیل میڈیا کا پتہ لگانا
نقصان
سیل کی قسم مخصوص میڈیم فارمولے کی ضروریات
اعلی ریجنٹ طہارت کی ضرورت ہے۔
ترقی میں سست روی۔

2.2.1 پی ایچ لیول
زیادہ تر عام ممالیہ سیل لائنیں pH 7.4 پر اچھی طرح بڑھتی ہیں، اور مختلف سیل لائنوں کے درمیان فرق کم ہوتا ہے۔تاہم، کچھ تبدیل شدہ سیل لائنز کو قدرے تیزابی ماحول (pH 7.0 - 7.4) میں بہتر طور پر بڑھتے ہوئے دکھایا گیا ہے، جب کہ کچھ عام فبروبلاسٹ سیل لائنز قدرے الکلین ماحول (pH 7.4 - 7.7) کو ترجیح دیتی ہیں۔Sf9 اور Sf21 جیسی کیڑے کی سیل لائنیں pH 6.2 پر بہترین بڑھتی ہیں۔

2.2.2 CO2 کی سطح
گروتھ میڈیم کلچر کے پی ایچ کو کنٹرول کرتا ہے اور پی ایچ میں ہونے والی تبدیلیوں کے خلاف مزاحمت کرنے کے لیے کلچر میں موجود خلیوں کو بفر کرتا ہے۔عام طور پر، یہ بفرنگ نامیاتی (مثال کے طور پر، HEPES) یا CO2-بائی کاربونیٹ پر مبنی بفروں پر مشتمل ہو کر حاصل کی جاتی ہے۔چونکہ میڈیم کا پی ایچ تحلیل شدہ کاربن ڈائی آکسائیڈ (CO2) اور بائک کاربونیٹ (HCO3-) کے نازک توازن پر منحصر ہے، اس لیے ماحولیاتی CO2 میں تبدیلی میڈیم کی پی ایچ کو بدل دے گی۔لہذا، CO2-بائکاربونیٹ پر مبنی بفر کے ساتھ درمیانے درجے کے بفر کا استعمال کرتے وقت، exogenous CO2 کا استعمال کرنا ضروری ہے، خاص طور پر جب کھلی ثقافت کے برتنوں میں خلیات کو کلچر کیا جائے یا زیادہ ارتکاز میں تبدیل شدہ سیل لائنوں کو کلچر کیا جائے۔اگرچہ زیادہ تر محققین عام طور پر ہوا میں 5-7% CO2 استعمال کرتے ہیں، زیادہ تر سیل کلچر تجربات عام طور پر 4-10% CO2 استعمال کرتے ہیں۔تاہم، ہر میڈیم میں ایک تجویز کردہ CO2 تناؤ اور بائی کاربونیٹ کا ارتکاز ہوتا ہے تاکہ درست پی ایچ اور آسموٹک دباؤ حاصل کیا جا سکے۔مزید معلومات کے لیے، براہ کرم میڈیم مینوفیکچرر کی ہدایات دیکھیں۔

2.3 پلاسٹک کی کاشت
سیل کلچر پلاسٹک مختلف سیل کلچر ایپلی کیشنز کے مطابق مختلف شکلوں، سائز اور سطحوں میں دستیاب ہیں۔سیل کلچر پلاسٹک سرفیس گائیڈ اور سیل کلچر کنٹینر گائیڈ کا استعمال کریں تاکہ آپ اپنے سیل کلچر ایپلی کیشن کے لیے صحیح پلاسٹک کا انتخاب کر سکیں۔
تمام Thermo Scientific Nunc سیل کلچر پلاسٹک دیکھیں (اشتہاری لنک)

2.4 درجہ حرارت
سیل کلچر کے لیے زیادہ سے زیادہ درجہ حرارت میزبان کے جسم کے درجہ حرارت پر کافی حد تک منحصر ہوتا ہے جہاں سے خلیے الگ تھلگ ہوتے ہیں، اور کچھ حد تک درجہ حرارت میں جسمانی تبدیلیوں پر ہوتا ہے (مثال کے طور پر، جلد کا درجہ حرارت کنکال کے پٹھوں سے کم ہو سکتا ہے۔ )۔سیل کلچر کے لیے، ضرورت سے زیادہ گرمی زیادہ گرمی سے زیادہ سنگین مسئلہ ہے۔لہذا، انکیوبیٹر میں درجہ حرارت عام طور پر زیادہ سے زیادہ درجہ حرارت سے تھوڑا نیچے رکھا جاتا ہے۔

2.4.1 مختلف سیل لائنوں کے لیے بہترین درجہ حرارت
زیادہ تر انسانی اور ممالیہ سیل لائنوں کو زیادہ سے زیادہ نشوونما کے لیے 36°C سے 37°C پر رکھا جاتا ہے۔
زیادہ سے زیادہ نشوونما کے لیے کیڑے کے خلیوں کی کاشت 27°C پر کی جاتی ہے۔وہ کم درجہ حرارت اور 27 ° C اور 30 ​​° C کے درمیان زیادہ آہستہ آہستہ بڑھتے ہیں۔30 ° C سے اوپر، کیڑے کے خلیات کی طاقت کم ہو جاتی ہے، یہاں تک کہ اگر یہ 27 ° C پر واپس آجائے، تو خلیے ٹھیک نہیں ہوں گے۔
ایویئن سیل لائنوں کو زیادہ سے زیادہ ترقی تک پہنچنے کے لیے 38.5°C کی ضرورت ہوتی ہے۔اگرچہ ان خلیوں کو 37 ° C پر رکھا جا سکتا ہے، لیکن یہ زیادہ آہستہ آہستہ بڑھیں گے۔
سرد خون والے جانوروں (جیسے امفبیئنز، ٹھنڈے پانی کی مچھلی) سے حاصل ہونے والی سیل لائنیں 15°C سے 26°C کے وسیع درجہ حرارت کو برداشت کر سکتی ہیں۔